телефон:   E-mail:

(812) 611-30-09

 

info@analitlab.ru

E-mail: info@analitlab.ru

телефон: (812) 611-30-09

Rambler's Top100  

Набор для окраски по Циль-Нильсену

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов для окраски по Циль-Нильсену предназначен для окраски микроорганизмов (микобактерий туберкулеза)

ПРИНЦИП РЕАКЦИИ

Кислотоустойчивыми называют бактерии, которые после окрашивания фуксином не обесцвечиваются под действием концентрированных минеральных кислот и спиртов. Особенностью этой группы бактерий является их невосприимчивость к красителям, поэтому для их окрашивания применяют подогретые концентрированные красители.

Принцип метода окраски по Циль-Нильсену основан на способности различных микроорганизмов оставаться окрашенным после воздействия спирто- и кислотосодержащими реагентами. Кислотоустойчивость обусловлена особенностями химического состава бактерий.

Наиболее эффективны способы окраски по Циль-Нильсену для выявления спирто- и кислотоустойчивых бактерий, в частности семейства Mycobacteriaceae (микобактерий туберкулеза, лепры и др.) и некоторых простейших (криптоспоридий). Используемые при этом основной фуксин и метиленовый синий позволяют выявить, помимо бактериальной флоры, фуксинофильные внутриклеточные включения, характерные для некоторых вирусных, особенно респираторных, инфекций.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает 200 исследований (при расходе 0,5 мл реагента на одно исследование).

1. Карболовый фуксин Циля 1 фл (100 мл)

2. Солянокислый спирт (концентрат) 1 фл (10 мл)

3.Метиленовый синий 1 фл (100мл)

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Предметное стекло перед проведением исследования должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол.

Полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх. Можно фиксировать мазки и в 96°спирте (10-15 минут).

Приготовление рабочего раствора солянокислого спирта

Для приготовления рабочего (3%) раствора солянокислого спирта, необходимо во флакон емкостью 100 мл внести концентрат солянокислого спирта (10 мл) (реагент 2) и добавить 90 мл этилового спирта (96º). Раствор тщательно перемешать, хранить в закрытом состоянии.

МЕТОДИКА ОКРАСКИ

1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок несколько капель карбол-фуксин Циля (реагент 1) и подогревают над пламенем спиртовки до появления паров. Эту температуру поддерживают в течение 1-2 минуты, не доводя до кипения. Охлаждают мазок до комнатной температуры.

2. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и основательно промывают в водопроводной воде.

3. Дифференцируют рабочим раствором солянокислого спирта до тех пор, пока мазок не примет бледно-розовый или бледно-фиолетовый тон (30-60 секунд).

4. Промывают в воде 15-30 и более секунд.

5. Докрашивают (несколько капель) метиленовым синим (реагент 3) 1-2 минуты.

6. Основательно споласкивают в воде и высушивают фильтровальной бумагой.

Мазки, перекрашенные метиленовым синим, можно дифференцировать 70° спиртом.

Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ

Микобактерии окрашиваются в красный цвет на общем голубом или синем фоне.

Создать сайт в Мегагрупп.ру