Набор реагентов для цитохимического определения неспецифической эстеразы в лейкоцитах

НАЗНАЧЕНИЕ

    Эстеразные реакции с различными субстратами способствуют (облегчают) дифференциации между миелобластными и монобластными лейкозами. Кроме реакции на нафтол- AS-D-ХЛОРАЦЕТАТЭСТЕРАЗУ, надежность которой сравнима с пероксидазной реакцией, реакция на альфа- нафтилацетат эстеразу является наиболее достоверной для идентификации монобластного и моноцитарного типов лейкозов.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает 10  исследований

В наборе:

1. Альфа-нафтилацетат.- 1фл.                    

2. Прочный синий «Б»    - 1фл.

3. Фосфатный буфер       -1 фл.

4. NaF                                -1фл.                   

Не вошедшие в набор:

1.  40°формалин.

2.   Ацетон;

3.    Дистиллированная вода;

4.    Краситель гематоксилин Карацци.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА

   Приготовление маточного раствора: содержимое флакона реактива альфа-нафтилацетата растворить в 2,5мл ацетона и 2,5мл дистиллированной воды. Хранить в холодильнике до 3 месяцев.

  Рабочий раствор: Перед началом окраски в 25мл дистиллированной воды растворить 0,5мл маточного раствора альфа-нафтилацетата из холодильника. Добавить 2,5мл фосфатного буфера и 12,5 мг синего прочного «Б». Смешать.

ПРИНЦИ РЕАКЦИИ

  Альфа-нафтилацетат эстераза ускоряет гидролизное расщепление альфа-нафтилацетата до уксусной кислты и альфа-нафтола, чье соединение с диазониевой солью образует красно-коричневое окрашивание, нерастворимое в воде.

ХОД РЕАКЦИИ

1. Зафиксировать мазки в парах формалина 10-15 мин.

2. Быстро ополоснуть.

3. Хорошо высушить.

4. Погрузить мазки в рабочий раствор в чашке Петри, перевернув стекло вниз мазком  (на дно) - 120мин. Поставить в холодное место (на лед или в холодильник).

5. Смыть проточной водой  - 10сек.

6. Докрасить ядра гематоксилином Карацци - 30мин.

7. Промыть стекла в проточной воде - 2мин.

8. Высушить.

Рабочий раствор стабилен 2,5 часа. Окраска должна производится не позднее 15 минут после приготовления рабочего раствора.

Процедура окраски с фтористым натрием

Разделить рабочий раствор на две равные части. В одну часть добавить 21 мг NaF для подавления реакции. Исследования проводят параллельно. Частичное или полное подавление реакции фтористым натрием используется для идентификации лейкозных монобластов.

Примечание:

Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.

Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.

При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.

Используются только свежие,нативные, сухие препараты, которые должны сохнуть на воздухе не менее 30 минут.

Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.

Зафиксированные мазки могут храниться в темноте, при комнатной температуре, в течение 3 дней.

РЕЗУЛЬТАТЫ ОКРАСКИ

Альфа-нафтилацетат эстераза выявляется в виде красно- коричневых гранул в цитоплазме клеток.