Набор реагентов для цитохимического определения неспецифической эстеразы в лейкоцитах
НАЗНАЧЕНИЕ
Эстеразные реакции с различными субстратами способствуют (облегчают) дифференциации между миелобластными и монобластными лейкозами. Кроме реакции на нафтол- AS-D-ХЛОРАЦЕТАТЭСТЕРАЗУ, надежность которой сравнима с пероксидазной реакцией, реакция на альфа- нафтилацетат эстеразу является наиболее достоверной для идентификации монобластного и моноцитарного типов лейкозов.
РЕАГЕНТЫ
Набор обеспечивает 10 исследований
В наборе:
1. Альфа-нафтилацетат.- 1фл.
2. Прочный синий «Б» - 1фл.
3. Фосфатный буфер -1 фл.
4. NaF -1фл.
Не вошедшие в набор:
1. 40°формалин.
2. Ацетон;
3. Дистиллированная вода;
4. Краситель гематоксилин Карацци.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА
Приготовление маточного раствора: содержимое флакона реактива альфа-нафтилацетата растворить в 2,5мл ацетона и 2,5мл дистиллированной воды. Хранить в холодильнике до 3 месяцев.
Рабочий раствор: Перед началом окраски в 25мл дистиллированной воды растворить 0,5мл маточного раствора альфа-нафтилацетата из холодильника. Добавить 2,5мл фосфатного буфера и 12,5 мг синего прочного «Б». Смешать.
ПРИНЦИ РЕАКЦИИ
Альфа-нафтилацетат эстераза ускоряет гидролизное расщепление альфа-нафтилацетата до уксусной кислты и альфа-нафтола, чье соединение с диазониевой солью образует красно-коричневое окрашивание, нерастворимое в воде.
ХОД РЕАКЦИИ
1. Зафиксировать мазки в парах формалина 10-15 мин.
2. Быстро ополоснуть.
3. Хорошо высушить.
4. Погрузить мазки в рабочий раствор в чашке Петри, перевернув стекло вниз мазком (на дно) - 120мин. Поставить в холодное место (на лед или в холодильник).
5. Смыть проточной водой - 10сек.
6. Докрасить ядра гематоксилином Карацци - 30мин.
7. Промыть стекла в проточной воде - 2мин.
8. Высушить.
Рабочий раствор стабилен 2,5 часа. Окраска должна производится не позднее 15 минут после приготовления рабочего раствора.
Процедура окраски с фтористым натрием
Разделить рабочий раствор на две равные части. В одну часть добавить 21 мг NaF для подавления реакции. Исследования проводят параллельно. Частичное или полное подавление реакции фтористым натрием используется для идентификации лейкозных монобластов.
Примечание:
Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.
Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.
При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.
Используются только свежие,нативные, сухие препараты, которые должны сохнуть на воздухе не менее 30 минут.
Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.
Зафиксированные мазки могут храниться в темноте, при комнатной температуре, в течение 3 дней.
РЕЗУЛЬТАТЫ ОКРАСКИ
Альфа-нафтилацетат эстераза выявляется в виде красно- коричневых гранул в цитоплазме клеток.
|