телефон:   E-mail:

(812) 611-30-09

 

info@analitlab.ru

E-mail: info@analitlab.ru

телефон: (812) 611-30-09

Rambler's Top100  

Набора реагентов для цитохимического определения хлорацетат эстеразы в лейкоцитах

НАЗНАЧЕНИЕ

  Реакция на нафтол-АSD-хлорацетатэстеразу, наряду с миелопероксидазой и реакцией на липиды с суданом черным Б,  является маркерной для выявления клеток миелоидной серии, особенно лейкозных миелобластов.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает 10 исследований

В наборе:

1.       Нафтол-АSD-хлорацетат

2.       Трис-буфер ( рН 7,1)

3.       Прочный синий Р.Р.

Не вошедшие в набор:

1.      10% спирт-формалин;

2.       Ацетон;

3.       Дистиллированная вода;

4.       Краситель «Диахим-ЦитоСтейн-ГМ» (гематоксилин Майера).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА

1.       Содержимое флакона нафтол-АSD-хлорацетата растворить в 0,1 мл ацетона, добавить 5 мл дистиллированной воды и 5 мл трис-буфера .

2.       К полученному раствору добавить 10мг прочного синего РР.

3.       Смешать, отфильтровать.

Данного количества раствора достаточно для окраски 4-5 стекол.

ПРИНЦИП РЕАКЦИИ

   Субстратом неспецифических эстераз являются эфиры карбоновых кислот. Метод основан на том, что азокраситель, образующийся при сочетании освобождающегося при гидролизе альфа-нафтола с различных стабилизированными диазотами, осаждается в месте локализации фермента в нейтральной среде.

В цитоплазме клетки определяются мелкие синефиолетовые гранулы.

ХОД РЕАКЦИИ

  Зафиксировать мазки в 10% спирт - формалиновой смеси. Сухие мазки крови или костного мозга поместить для фиксации в емкость с 10% раствором

формалина на этиловом спирте - 30сек. 

Промыть дистиллированной водой.

Поместить в рабочий раствор при комнатной температуре 30мин.

Промыть проточной водой 5 мин.

Докрасить ядра гематоксилином Майера. 15ми

Промыть стекла в проточной воде 10сек.

Высушить.

 

Примечание:

Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.

Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.

При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.

Используются только свежие,нативные, сухие препараты, которые должны сохнуть на воздухе не менее 30 минут.

Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.

Зафиксированные мазки могут храниться в темноте, при комнатной температуре, в течение 3 дней. 

РЕЗУЛЬТАТЫ ОКРАСКИ

  Хлорацетатэстераза выявляется в виде сине-фиолетовых гранул в цитоплазме клеток гранулоцитарного ряда. В моноцитах и лимфоцитах этот фермент отсутствует.

Создать сайт в Мегагрупп.ру