телефон:   E-mail:

(812) 611-30-09

 

info@analitlab.ru

E-mail: info@analitlab.ru

телефон: (812) 611-30-09

Rambler's Top100  

Наборы реагентов для цитохимического определения фосфолипидов в лейкоцитах с помощью судана черного Б

НАЗНАЧЕНИЕ

   Основным компонентом жировых веществ в гемопоэтических клетках являются  фосфолипиды (фосфорсодержащие сложные эфиры глицерина). Они являются составной частью структур цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса и используются в качестве энергетического и пластинчатого комплекса и используется в качестве энергетического и пластинчатого материала.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает 6 исследований (от 1 до10 стекол за 1 исследование)

В наборе:

 -   спиртовой раствор судана черного Б - 2фл.

 -   спиртовой раствор фенола - 2фл.

 -   бифосфат натрия кристаллический - 6фл.

Не вошедшие в набор:

1. 40% формалин;

2. Спирт этиловый 70º.

3. 0,5% раствор красителя Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому.

4.  Вода дистиллированная.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА

Получение буферного раствора :

 1. Растворить навеску фосфата натрия в 25 мл дистиллированной воды.

 2. Отмерить 7,5 мл спиртового раствора фенола. Соединить с 25 мл раствора фосфата натрия. Раствор сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев при температуре 0-+4°С.            

Рабочий раствор:

К 30мл спиртового раствора судана добавить 20мл буферного раствора. 

ПРИНЦИП РЕАКЦИИ

    Выявление фосфолипидов основано на применении липофильных красителей, растворяющихся и избирательно концентрирующихся во внутриклеточных липидах.

ХОД РЕАКЦИИ

1.    Высушенные на воздухе мазки крови или костного мозга фиксируют в парах формалина во влажной закрытой камере при t 37°- 10 мин.

2.    Быстро ополоснуть.

3.    Просушить фильтровальной бумагой.

4.    Поместить в рабочий красящий раствор на 1 час.

5.    Ополоснуть в 70°  этаноле 3 сек.

6.   Быстро промыть проточной водой.

7.   Докрасить 0,5% раствором краски Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому 15-20 мин.

8.   Быстро промыть, промокнуть фильтровальной бумагой, высушить.

Примечание:

   Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации

Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.

При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.

Приготовленные мазки не рекомендуется хранить более 24часов, т. к. активность большинства внутриклеточных ферментов снижается .

Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.

Нефиксированные мазки могут храниться в темноте в течение 3 недель.

РЕЗУЛЬТАТЫ ОКРАСКИ

Нормальные величины:

Большинство нейтрофилов (69-80%) у здоровых людей красятся интенсивно, 18-36% дают окраску средней интенсивности и 10% слабо окрашены.

СЦК в нейтрофилах 2,65-0,033.

Фосфолипиды обнаруживаются в виде коричнево-черных гранул в клетках гранулоцитарного ряда, начиная со стадии миелобласта. Наиболее богаты липидами зрелые гранулоциты, в цитоплазме которых липиды (суданофильный материал) расположена в основном в перинуклеарной зоне. В моноцитах редкие суданофильные гранулы рассеяны по всей цитоплазме.

В эозинофилах суданоположительное вещество локализуется по периферии специфических гранул, с неокрашенной центральной зоной, реакция в базофилах вариабильна.

Лимфоциты и их предшественники реагируют отрицательно. Также отрицательно реагируют тромбоциты и мегакариоциты и эритробласты. Мегакариоциты изредка могут демонстрировать диффузное окрашивание на фоне которого рассеяны очень мелкие суданофильные гранулы в цитоплазме и над ядром.

Изменения при патологических состояниях:

Липиды являются более чувствительным маркером миелоидной дифференцировки. В соответствии с ФАБ-классификацией критериями диагностики острых лейкозов для подтверждения миелоидной природы бластов необходимо выявление 3% и более бластных клеток, положительных по липидам.

Создать сайт в Мегагрупп.ру