Неонатальный скрининг

Набор реагентов НеонатальныйИФА-ТТГ-1 предназна­чен для количественного определения концентрации тирео­тропного гормона (ТТГ) в сухих пятнах крови новорожденных методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Набор Неонатальный ИФА-ТТГ выпускается в двух вариантах комплектации: на 192 определения и 960 опреде­лений.

ПРИНЦИП РАБОТЫ НАБОРА

В наборе использован «сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого вариан­та использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к -субъединице ТТГ. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверх­ность лунок), второе конъюгировано с пероксидазой хрена. В лунках, при добавлении исследуемого образца и конъюгата анти-ТТГ-пероксидаза, во время инкубации одновременно происходит иммобилизация ТТГ, содержащегося в исследуе­мом образце, и связывание с конъюгатом. При удалении содержимого из лунок и промывке происходит удаление избытка конъюгата, не связавшегося с иммобилизованным в ходе инкубации ТТГ. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству ТТГ в исследуемом образце.

Во время инкубации с раствором ТМБ происходит окраши-вание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорцио-нальна концентрации ТТГ в анализируемых пробах. После измерения оптической плотности раствора в лунках на осно­вании калибровочного графика рассчитывается концентрация ТТГ в анализируемых образцах.

• Комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов в рамке с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к ТТГ, маркирован «Стрипы с моноклональными антителами к ТТГ»;

• калибровочные пробы на основе цельной крови человека, аттестованные по Второму международному референсному препарату ТТГ человека WHO 80/558, содержащие известные количества ТТГ - 0; 10; 25; 50; 100 и 250 мкМЕ/мл крови (кон-центрации ТТГ в калибровочных пробах могут несколько отличаться от указанных величин, точные величины ука­заны на этикетках полосок); калибровочные пробы пред­ставляют собой высушенные пятна крови диаметром прибли­зительно 1 см на фильтровальной бумаге;

• концентрат конъюгата анти-ТТГ-пероксидаза, маркирован «Конъюгат Е»;

• аналитический буфер для разведения конъюгата, марки­рован «Буфер А»;

• концентрированный буферный раствор для промывки лунок, маркирован «Буфер Р»;

• раствор тетраметилбензидина, маркирован «Раствор ТМБ»;

• стоп-реагент (1 Н соляная кислота), маркирован «Стоп-реагент»;

• контрольные пробы с известным содержанием ТТГ, пред­ставляют собой высушенные пятна крови диаметром прибли­зительно 1 см на фильтровальной бумаге, маркированы «Контрольные пробы»;

• пакет полиэтиленовый закрывающийся (при упаковке стрипов в пакет из 2-слойного полиэтилена).

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

1. Специфичность. Перекрестная реакция обоих моно­клональных антител к β-ТТГ с хорионическим гонадотропи­ном, лютеинизирующим и фолликулостимулирующим гормо­нами человека не превышает 0,2 %.

2. Коэффициент вариации результатов определения ТТГ в одном и том же образце с использованием набора Неона­тальный ИФА-ТТГ-1 не превышает 15 %.

3. Чувствительность. Минимальная достоверно опреде­ляемая набором концентрация ТТГ в сухих пятнах крови человека не превышает 3 мкМЕ/мл крови.

4. Ожидаемые показатели. Измерение уровня ТТГ в об­разцах сухих пятен крови как метод диагностики врожденного гипотиреоза основано на использовании cut-off значения, позволяющего разделить группы эутиреоидных и гипотире­оидных новорожденных. Общепринятое cut-off значение рав­но 20 мкМЕ/мл крови (что эквивалентно 40 мкМЕ/мл в сыво­ротке крови со значением гематокрита 50-55 %). Это cut-off значение адекватно при анализе сухих пятен крови, взятых из пятки новорожденных на 3-5-й день после рождения.

Рекомендуется в каждой лаборатории при использовании набора уточнить cut-off значение.